Стерилизация и введение в культуру in vitro
Перед тем как приступить к работе с растениями, мы прослушали лекцию по основам биотехнологии, посвящённую культивированию in vitro. Затем перешли к практике: приготовили питательную среду Мурасиге–Скуга (MC) — рассчитали количество каждого компонента, разлили по пробиркам, чашкам Петри и фальконам и подготовили к стерилизации.
Параллельно мы провели анализ научной литературы по методам стерилизации эксплантов земляники. Изучили отечественные и зарубежные публикации и составили сравнительную таблицу способов стерилизации. Для дальнейшей работы выбрали методику обработки семян 70%-ным этанолом (до 1 минуты) и 3%-ным раствором перекиси водорода в течение 20 минут.
Параллельно мы провели анализ научной литературы по методам стерилизации эксплантов земляники. Изучили отечественные и зарубежные публикации и составили сравнительную таблицу способов стерилизации. Для дальнейшей работы выбрали методику обработки семян 70%-ным этанолом (до 1 минуты) и 3%-ным раствором перекиси водорода в течение 20 минут.
Приготовление среды
Введение семян в культуру in vitro
Для стерилизации семян мы приготовили 3%-ный раствор перекиси водорода из 40%-ного концентрата. Семена обрабатывали в течение 20 минут, затем отфильтровали, перенесли на стерильную фильтровальную бумагу и высадили на питательную среду MC. В каждую чашку Петри поместили по 6–8 семян (по три чашки на каждый из пяти сортов).
После посева чашки герметизировали парафильмом и поместили в климатическую камеру при 25 °С с фотопериодом 16 часов света для проращивания.
После посева чашки герметизировали парафильмом и поместили в климатическую камеру при 25 °С с фотопериодом 16 часов света для проращивания.
Введение почек в культуру in vitro
Параллельно мы вводили в культуру вегетативные почки. Для этого использовали розетки земляники, предоставленные ВИР. Экспланты промыли проточной водой для удаления поверхностных загрязнений, затем обработали 10% раствором «Белизны» в течение 15 минут. После стерилизации провели очистку и трёхкратную промывку стерильной дистиллированной водой. Подготовленные почки высадили на питательную среду MS и поместили в фитотрон при тех же условиях — 25 °С и 16-часовом световом дне.
Стерилизация почек
